2-取代-4-內(nèi)蒙古氨基嘧啶?類化合物的合成及抗腫瘤活性的初步研究~

內(nèi)蒙古氨基嘧啶癌癥,聞?wù)呱?嚴(yán)重的威脅人民的健康和生活質(zhì)量。我國(guó)是全球新增癌癥病例以及因癌癥死亡人數(shù)最多的國(guó)家。隨著生物學(xué)及其相關(guān)技術(shù)的不斷發(fā)展,對(duì)腫瘤的治療已經(jīng)到了分子水平。靶向治療已經(jīng)成為腫瘤治療發(fā)展的方向,它豐富了腫瘤的治療手段,為患者帶來(lái)了治愈的希望。研究表明嘧啶類化合物在腫瘤的靶向治療方面具有良好應(yīng)用價(jià)值,含有4-芳氨基嘧啶的酪氨酸激酶抑制劑奧斯替尼和伊馬替尼等,在治療初期,均能表現(xiàn)出較好的效果。令人遺憾的是用藥9-14個(gè)月后,會(huì)出現(xiàn)不同程度的耐藥性。因此,設(shè)計(jì)并合成毒性小、耐藥性低的抗腫瘤藥物迫在眉睫。本文利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)軟件Sybyl,設(shè)計(jì)并化學(xué)合成了一系列2-取代-4-芳氨基嘧啶類化合物。以期望發(fā)現(xiàn)高活性、低毒副作用的新型抗腫瘤化合物。本研究主要內(nèi)容如下:1.在總結(jié)癌癥的治療方法,特別是分子靶向治療的研究進(jìn)展、具有生物活性的嘧啶及其衍生物的研究進(jìn)展以及以嘧啶為母核的酪氨酸激酶抑制劑研究進(jìn)展的基礎(chǔ)上,利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)軟件Sybyl,以?shī)W斯替尼為參照配體,EGFR（PDB No:4LL0）為受體,與設(shè)計(jì)的小分子化合物進(jìn)行分子對(duì)接,虛擬篩選出15個(gè)2-取代-4-芳氨基嘧啶類化合物作為化學(xué)合成的目標(biāo)化合物。2.為合成虛擬篩選出的目標(biāo)化合物。首先進(jìn)行了重要中間體2-氯-4-芳氨基嘧啶類化合物的合成。分別通過(guò)3-氯-4-氟苯胺、3-乙炔基苯胺、3-氯-4-（3-氟芐氧基）苯胺、3-氯-4-（吡啶-2-基甲氧基）苯胺和3-氯-4-（3-（三氟甲基）苯氧基）內(nèi)蒙古氨基嘧啶苯胺5種芳胺與2,4-二氯嘧啶分子中4-位氯之間發(fā)生選擇性芳環(huán)上的親核取代反應(yīng),以乙醇為溶劑、Et3N為縛酸劑,合成得到了 2-氯-4-（3-氯-4-氟苯氨基）嘧啶、2-氯-4-（3-乙炔基苯氨基）嘧啶、2-氯-4-（3-氯-4-（3-氟芐氧基）苯氨基）嘧啶、2-氯-4-（3-氯-4-（吡啶-2-基甲氧基）苯氨基）嘧啶和2-氯-4-（3-氯-4-（3-（三氟甲基）苯氧基）苯氨基）嘧啶5種中間體化合物,收率為65～68%。3.以2-二乙氨基乙胺分別與5種2-氯-4-芳氨基嘧啶中間體間的親核取代反應(yīng)合成得到了 5種“N”系列目標(biāo)化合物C1-C5,收率為66～82%。以2-二乙氨基乙醇分別與5種2-氯-4-芳氨基嘧啶中間體之間的親核取代反應(yīng)合成得到了 5種“O”系列的目標(biāo)化合物C6-C10,收率為50～58%。最后以N,N-二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽的異硫脲鹽為原料經(jīng)水解后,與5種2-氯-4-芳氨基嘧啶中間體之間的親核取代反應(yīng)合成得到了 5種“S”系列的目標(biāo)化合物C11-C15,收率為62～66%。合成的15個(gè)目標(biāo)化合物均經(jīng)1H NMR、13C NMR、HRMS、IR進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證。4.以臨床抗腫瘤藥物拉帕替尼、吉非替尼、奧斯替尼為陽(yáng)性對(duì)照,以人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人皮膚鱗癌細(xì)胞A431、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549和NCI-H1975作為受試細(xì)胞,利用MTT法對(duì)所合成的15個(gè)2-取代-4-芳氨基嘧啶類化合物進(jìn)行了體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性的評(píng)價(jià),結(jié)果表明C3、C5、C6、C13和C15對(duì)這四種腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較好的增殖抑制活性,其IC50值為0.36～6.24 μM,明顯優(yōu)于臨床藥物吉非替尼和拉帕替尼,特別是化合物C3和C13對(duì)4個(gè)受試腫瘤細(xì)胞增殖的抑制活性分別為0.36～3.48 μM和0.40～1.88 μM,與臨床藥物奧斯替尼的活性（0.05～2.67 μM）相當(dāng)。并對(duì)化合物C3進(jìn)行了誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期影響的評(píng)價(jià),結(jié)果顯示化合物C3作用于A549細(xì)胞48 h,內(nèi)蒙古氨基嘧啶能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并將細(xì)胞周期停滯在G0/G1期。