磺胺二甲氧嘧啶單克隆抗體的制備及免疫學(xué)快速檢測(cè)方法的建立：

內(nèi)蒙古玉嘧磺胺：磺胺類藥物(sulfonamides，SAs)在臨床上主要用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病，還常作為飼料添加劑在動(dòng)物生產(chǎn)中長(zhǎng)期應(yīng)用。然而過量使用會(huì)引起人過敏性反應(yīng)，且可能有致癌性，因此在動(dòng)物性食品中殘留引起生態(tài)環(huán)境污染和人類健康危害的潛在威脅已倍受關(guān)注，而磺胺二甲氧嘧啶(SDM)在磺胺類藥物的使用中占有很大比例。因此，研究出一種操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏的測(cè)定SAs殘留的方法，對(duì)于畜產(chǎn)品的安檢具有實(shí)際意義。 本研究在分析磺胺二甲氧嘧啶分子結(jié)構(gòu)和免疫原性的基礎(chǔ)上，運(yùn)用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)了單抗，并組裝了其免疫學(xué)快速檢測(cè)試劑盒和試紙條。主要研究結(jié)果如下： 1．用重氮化方法將SDM偶聯(lián)于牛血清白蛋白(BSA)和雞卵清蛋白(OVA)，合成了人工免疫原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM，通過紫外(UV)、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鑒定，表明BSA-SDM偶聯(lián)成功，獲得了高價(jià)、敏感、特異的抗血清。 2．用BSA-SDM免疫Balb／C小鼠5只，4次免疫后用間接ELISA和阻斷ELISA選擇出細(xì)胞融合備用小鼠1只，內(nèi)蒙古玉嘧磺胺應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)篩選出1B4、3D9、4E1共3株敏感特異的雜交瘤細(xì)胞，用體內(nèi)誘生腹水法制備SDM mAb，經(jīng)鑒定，其間接ELISA效價(jià)細(xì)胞培養(yǎng)上清分別為1：3.2×10~2、1：5.12×10~2、1：8.1×10~2，腹水效價(jià)分別為1：2.56×10~5、1：2.56×10~5、1：5.12×10~5，親和常數(shù)(Ka)分別為2.16×10~9、3.28×10~9、1.71×10~(10)(L／mol)，其中親和力較高的4E1株阻斷ELISA測(cè)定其IC_(50)為16.64ng／ml，與磺胺間甲氧嘧啶的交叉反應(yīng)率為5％，與其他同類化合物無CR。本實(shí)驗(yàn)制備的SDM mAb可用于SDM殘留檢測(cè)的免疫學(xué)試驗(yàn)。 3．應(yīng)用SDM mAb，依據(jù)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)和膠體金免疫層析試驗(yàn)(GICA)原理，分別組裝了SDM殘留快速檢測(cè)阻斷ELISA試劑盒和快速檢測(cè)免疫金標(biāo)試紙(SDM-Strip)。SDM-Kit的標(biāo)準(zhǔn)曲線呈S型，符合4參數(shù)logit曲線擬合，線性檢測(cè)范圍為1.0～128.0ng／ml。并用于檢測(cè)尿液中磺胺二甲氧嘧啶的殘留，試劑盒進(jìn)行豬尿中的磺胺二甲氧嘧啶殘留檢測(cè)可以在一個(gè)小時(shí)內(nèi)完成；試紙條則可以在8到10分鐘內(nèi)完成。兩種產(chǎn)品均具有快速、敏感、特異、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，內(nèi)蒙古玉嘧磺胺適合于SDM殘留快速檢測(cè)的推廣應(yīng)用。