內(nèi)蒙古氨基嘧啶廠家，苦木主要活性成分4,5-二甲氧基—鐵屎米酮的體內(nèi)外代謝及其機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究：

中藥苦木Picrasma quassiodes(D.Don)Benn.民間多用于治療腸胃炎,毒蛇咬傷,感染和高血壓,是許多中藥制劑(如苦木注射液、苦木合劑、苦木片,等)的重要組成成分,臨床上用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾、高血壓、感冒、上呼吸道感染、急性扁桃體炎及各種急性感染性疾病?，F(xiàn)代藥理研究表明,4,5-二甲氧基-鐵屎米酮作為苦木的主要活性成分之一,具有抗炎、抗癌、抑制cAMP活性、降壓、抗病毒等多種藥理作用。相比于其較廣泛的藥理作用研究而言,關(guān)于4,5-二甲氧基-鐵屎米酮藥代動(dòng)力學(xué)的研究卻鮮有報(bào)道。本文應(yīng)用高分辨、高靈敏液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(如UPLC-Q-TOF-MS/MS和UPLC-MS/MS技術(shù)),對(duì)4,5-二甲氧基-鐵屎米酮體內(nèi)外藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行了如下研究:1.4,5-二甲氧基-鐵屎米酮的體內(nèi)外代謝物鑒定研究利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù),研究了 4,5-二甲氧基-鐵屎米酮在不同種屬(人、狗、大鼠及小鼠)肝微粒中的代謝物種類與含量,以及SD大鼠肌肉注射4,5-二甲氧基-鐵屎米酮后血漿與尿液中的代謝物種類與含量。結(jié)果表明:①4,5-二甲氧基-鐵屎米酮分別經(jīng)4種屬肝微粒體溫孵50 min后,在大鼠和小鼠肝微粒體中檢測(cè)到了 8個(gè)原藥的Ⅰ相代謝產(chǎn)物,包括2個(gè)去甲基化代謝產(chǎn)物M1和M2,3個(gè)羥基化代謝代謝產(chǎn)物M3、M4和M5,3個(gè)去甲基化及羥基化的代謝產(chǎn)物M6、M7和M8。在人和狗肝微粒體中檢測(cè)到了除M7之外的其它7個(gè)原藥Ⅰ相代謝產(chǎn)物。②大鼠肌肉注射給藥(200 μg/kg)后,在血漿中檢測(cè)到3個(gè)Ⅰ相代謝產(chǎn)物(M1、M2和M5),在尿液中檢測(cè)到5個(gè)Ⅰ相代謝產(chǎn)物(M1-M5),且在血漿和尿液中均沒(méi)有檢測(cè)到原藥的Ⅱ相代謝產(chǎn)物。③體外肝微粒體代謝產(chǎn)物中,去甲基化代謝產(chǎn)物M1和M2是4,5-二甲氧基-鐵屎米酮的主要代謝物,羥基化代謝產(chǎn)物M3-M5是其次要代謝物。體內(nèi)代謝與體外代謝具有一定程度的相似性,即甲基化代謝為主,羥基化代謝為輔。內(nèi)蒙古嘧啶2.4,5-二甲氧基-鐵屎米酮的體外代謝酶鑒定研究在鑒定了體外代謝物的基礎(chǔ)上,選用9個(gè)人源性CYP450亞酶化學(xué)抑制劑(CYP1A2/α-奈黃酮、內(nèi)蒙古氨基嘧啶CYP2C9/氟康唑、CYP2C19/噻氯匹定、CYP2D6/奎尼丁、CYP2E1/二烯丙基二硫、CYP3A4/酮康唑、CYP2A6/甲氧沙林、CYP2C8/吡格列酮和CYP2B6/氯吡格雷),分別與原藥4,5-二甲氧基-鐵屎米酮在人肝微粒體中進(jìn)行體外溫孵反應(yīng),并應(yīng)用UPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)各代謝物的生成量篩選參與原藥代謝的CYP450亞酶,再通過(guò)人重組CYP450亞酶體外代謝實(shí)驗(yàn)確定人肝微粒體中參與原藥代謝的酶。結(jié)果表明,人肝微粒體中CYP3A4參與了原藥代謝物M1-M5的生成,CYP2C9參與了代謝物M1-M3和M6-M8的生成,CYP2D6參與了代謝物M3的生成。3.4,5-二甲氧基-鐵屎米酮體外對(duì)人CYP450酶活性的影響以人肝微粒體為酶源,非那西丁(CYP1A2)、安非他酮(CYP2B6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、睪酮(CYP3A4)、香豆素(CYP2A6)和紫杉酚(CYP2C8)為CYP450亞酶的探針底物,通過(guò)4,5-二甲氧基-鐵屎米酮與探針底物在人肝微粒體中的溫孵反應(yīng),檢測(cè)各探針底物代謝物的生成量,考察原藥對(duì)各代謝酶活性的體外影響。結(jié)果表明,4,5-二甲氧基-鐵屎米酮體外對(duì)其它CYP450亞酶活性沒(méi)有明顯影響,但可以反競(jìng)爭(zhēng)性抑制人CYP1A2介導(dǎo)的非那西丁 O-去乙基化反應(yīng),半數(shù)抑制濃度(IC50)和抑制常數(shù)(Ki)分別為1.7 μM和2.6 μM。原藥對(duì)人CYP1A2活性的較強(qiáng)抑制作用提示,臨床上當(dāng)CYP1A2底物藥物與4,5-二甲氧基-鐵屎米酮或含4,5-二甲氧基-鐵屎米酮中藥聯(lián)合用藥時(shí),可能存在藥物代謝相互作用風(fēng)險(xiǎn)。4.4,5-二甲氧基-鐵屎米酮及其代謝物在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究以3-甲基鐵屎米-2,6-二酮為內(nèi)標(biāo),甲醇沉淀蛋白為血漿樣品前處理方法、乙酸乙酯萃取為組織樣品前處理方法,建立了一種用于血漿和組織樣品中4,5-二甲氧基-鐵屎米酮及其代謝物M1(5-羥基-4-甲氧基鐵屎米酮)和M2(M1的同分異構(gòu)體)含量測(cè)定的UPLC-MS/MS方法,并將該法用于研究原藥肌肉注射給藥后它們?cè)诖笫篌w內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和組織分布。色譜條件:C18色譜柱(2.0mm×150mm,4.6μm),0.1%甲酸水(A)-甲醇(B)混合液為流動(dòng)相。0-14.0 min,保持40%B;14.01-19.0 min,40%B線性增加到85%B;19.01-24.0 min,繼續(xù)保持40%B平衡色譜柱;流速:0.4 mL/min;柱溫:40℃;進(jìn)樣體積:10 μL。質(zhì)譜條件:在ESI正離子多反應(yīng)離子檢測(cè)(MRM)模式下,用于定量檢測(cè)的離子對(duì)分別是m/z281.0→167.1(4,5-二甲氧基-鐵屎米酮)、m/z267.0→168.1(M1和M2)和m/z251.0→195.1(內(nèi)標(biāo))。該方法用于定量分析的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性、內(nèi)蒙古玉嘧磺胺基質(zhì)效應(yīng)與回收率結(jié)果均符合FDA規(guī)定的體內(nèi)樣品分析要求。大鼠單次肌肉注射4,5-二甲氧基-鐵屎米酮后的藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果表明:肌肉注射給藥后,4,5-二甲氧基-鐵屎米酮體內(nèi)吸收快速(Tmax=5.4-6.4 min),且消除速度也較快(t1/2z=64.9-77.7 min);隨著給藥劑量的增大,4,5-二甲氧基-鐵屎米酮的AUC0-t和Cmax增加,t1/2z保持不變,說(shuō)明4,5-二甲氧基-鐵屎米酮的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)特征。與原藥的AUC0-t比較,代謝物M1的只有原藥的15.2-19.9%,而代謝產(chǎn)物M2的則是原藥的194.1-218.4%,說(shuō)明M2是原藥體內(nèi)的主要代謝物。組織分布結(jié)果顯示,4,5-二甲氧基-鐵屎米酮在檢測(cè)的組織中分布速度快、范圍廣,給藥64 min后在組織中就檢測(cè)不到原藥,說(shuō)明其在組織中的消除也很快。此外,原藥在肝臟組織中分布最多,在其它組織中的分布沒(méi)有明顯差別;且代謝物M1、M2只在肝臟中能被檢測(cè)到。上述研究結(jié)果對(duì)深入了解中藥苦木主要活性成分4,5-二甲氧基-鐵屎米酮的體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化與分布,代謝相互作用,內(nèi)蒙古氨基嘧啶以及基于苦木生物堿的新藥開(kāi)發(fā)與臨床合理用藥,均具有積極作用。